安徽农业科学，Journal of Anhui Agri Sci．2,011，39(16)：9587，9589 责任编辑 李占东 责任校对 傅真治
荞麦茎叶中总黄酮的提取工艺研究
杨玉霞 ，蒋召雪 ，王安虎 ，安金玲 ，胡平 ，夏燕莉
(1．四川，肯巾医药科学院，四川成邰 6101)41；2．两昌学院， q川两昌615013)
摘要 [目的]研究甜荞和苦养茎叶中总黄酮的提取工艺．．[方法]以总黄酮得率为指标，通过正交试验优选出最佳提取条件。[结果]
最佳提取工艺以75％ 乙醇为溶剂，1：25的料液比在 65℃振 荡提取 2 h。在该优化奈件下，甜荞、苦荞茎叶中总黄酮得率分别为5．65％、
6．54％ f结论]该方法简单、快捷，便于推广和普及，是提取荞麦茎叶中总黄酮的有效方法。
关键词 甜荞：苦荞；总黄酮；正交设计；提取工艺
中图分类号 $517 文献标识码 A 文章编号 0517—661 l(201 1)16—09587一Ol
Studyor Extraction Technology of Total Flavonoids froln Stems and Leaves of Buckwheat
YANG Yu-xia et al (Sichuan Aca(temy of Ttaditiona1 Chinese Medicine Sciences．Chengdu．Siehuan 610041)
Abstract Objective T()slL1d-~lhe extral- "1 leehn~~logy(1f Iotal tlavon(rids from the steins and leaves of Fagopyrum esculentum Moench and
Fagopyrun tatarilly．[Method]wjth lhe yiehl of total t]avonoids as the index，the best extIaction technology was optimized by orthogonal test．
1 Result j Under the conditions of 75％ etham)1 tlS tlle solVellt，1：25 materia1 1iquid ratio and vibration in 65℃ for 2 h，the yield of tota1 na．
vonoids from the stenls ant1 leaves of Fagop)ruⅢescldentum Moench and Fagopyrum tataricum were 5．65％ and 6．54％ respectively．f Con．
elusion 1 Tl1e method tA as simple．rapid~lll(1 easy to popularize．which was the effecfive method for extracting total flavonoids from the stems
and leaves of buckwheat．
Key words Fag％orum esclt]entltm Moench；Fagopyrum tataricum； rotal flavonoids；Orthogonal design；Extraction technology
荞麦为蓼科(Polygonaceae)双子叶植物，富含黄 类化
合物，主要有甜荞和苦养2个栽培种 荞麦黄酮具有抗氧
化 、抗癌 、防痛 、护肝 、抗菌等多种生理功能 荞麦花、叶中黄
酮含量远高于籽粒 。。 ，茎巾黄酮含量也较高 但目前主
要以荞麦籽粒为原料提取黄酮，冈原料价格偏高、_牛产工艺
复杂导致价格昂贵。从荞麦茎叶中提取黄酮，不仅可变废为
宝，且可节约成本 正玉珠等 研究表明，荞麦初花期是提
取黄酮的最好时期。 此，笔者采用正交试验，优选 荞麦
初花期茎叶中总黄酮的提取r 条件，以期为荞麦的综合开
发利用提供理论依据 ．
1 材料与方法
1．1 材料 供试材料为2份本地大面积种植、生育期相近
的甜荞和苦荞地方品种。
1．2 标样与试剂 芦丁标准品：成都科龙化T厂提供；其他
试剂均为分析纯(A1C1 、乙醇等)。
1．3 仪器 UV2800型紫外可见分光光度汁、Al1 basic分析
用研磨机、CHZ一82型恒温振荡 、EP214DC分析天平等．．
1．4 方法
1．4．1 黄酮标准 线的绘制．．精密称取 120℃十燥至恒蓖
的芦丁标准品50．4 mg，用 75％乙醇溶解定容至25 m1，摇匀
得标准贮液 准确吸 10 m1标准 液于 10O m1容量瓶中，刚
75％乙醇稀释至刻度 ，摇匀得标准应朋液 准确吸1．0、2．0、
3．0、4．0、6．0、8．0、10．0 ml丁25 ml容量瓶【{1，加 l％A1CI 5．0
ml，加水至刻度，混匀，静置6 rain，取5．0 nl 3 000 r／min离心
10 min备用。75％乙醇作空 白 墩 上清液 0．5 ml加入1．0
mll％ AIC1 和 1．0 ml 75％乙醇存 420 nlxl处测定吸光度。
以吸光度( )为横坐标，浓度(c)为纵坐标，绘制标准曲线 ．
用最小二乘法进行线性同归，得回归方程 C=0．034 IA一
基金项 目
作者简介
收稿 日期
四川省教育厅青年基金项目(200611019)
杨玉霞 (1980一)，女，四川乐山人，助理研究员，博士，从事
中药材遗传育种、资源评价与利用等研究。
20l 1-(】3—14
0．0OO 5(r：0．999 2)。
1．4．2 正交试验设计。据资料及预备试验结果，选用乙醇
浓度、物料比、提取时问和提取温度4因素，3个水平，以提
取样品中总黄酮得率为指标，进行 L日(3 )正交试验设计
(表 1)。
表1 正交试验因素水平
Table 1 Factors and levels
1．4．3 样品中总黄酮的测定。在荞麦初花期，采集植株，洗
净擦f，分离出茎、叶，并在65℃下干燥至恒重，粉碎后过 60
目筛备用 将预处理的荞麦茎叶混合物准确称重后，按表 1
要求进行振荡提取，过滤得滤液，并用相应浓度的乙醇定容
至50 mI，经离心后吸取 2．0 ml上清液至25 HIl容量瓶，用
l％A1C1 定容至刻度，于420 nm处测定，并根据标准曲线计
算样品中总黄酮浓度及得率。
1．4．4 验证试验。在所得的最佳提取工艺下提取养麦茎叶
总黄酮，计算得率，重复5次。 ．
2 结果与分析
2．1 正交试验结果 荞麦茎叶总黄酮提取的正交试验结果见
表2。南表2可知，4因素对甜荞茎叶总黄酮提取结果的影响
依次为A>B>D>C，即乙醇浓度对总黄酮含量的影响最大，
料液比次之，提取时问影响最小，苦荞则为A>B>C>D。方
差分析均表明，乙醇浓度对总黄酮得率具有显著性影响，提取
时间的影响不显著，这与试验结果的直观分析基本一致。由
各 素水平优选到最佳提取工艺均为 A B：c D ，即用25倍
原料重的75％乙醇，65℃振荡提取2 h的得率最高。
(下转第9589页)
39卷 16期 尹丽平 反相高效液相色谱法测定芦丁中槲皮素的含量 9589
提取，结果表明，以甲醇为溶媒提取时间短，提取杂质少。
2．3 检测波长的确定 用 uV检测器分析了槲皮素对照品
色谱峰和样品中所测定成分相应色谱峰的紫外光谱，结果两
者的紫外光谱基本一致，槲皮素在(259±1)nlTl有最大吸收。
2．4 线性关系考察 取对照品溶液，分别进样，按试验色谱
条件测定峰面积，以对照品溶液进样量 为横坐标，峰面积
的积分值为纵坐标，绘制的标准曲线见图3。结果表明，槲皮
素含量在4～12 g／rnl范围内具有良好的线性关系。
12
矗
三l0
三 8
娶
4
选样量Sample Size／f×10 ml
图3 槲皮素含量标准曲线
Fig．3 Standard cnl've of quereefin content
2．5 稳定性试验 取样溶液，分别在制备后 0、3、6．9、12、
18、24、36个月按试验色谱条件测定峰面积，结果表明，溶液
在3年内基本稳定。
2．6 重复性试验 取同一批芦丁的对照品溶液5份，分别
(上接第9587页)
表2 正交试验结果
Table 2 Results of orthogonal experiment
2．2 验证试验结果 按 A：B c D：组合进行 5次平行试验，
甜荞、苦荞茎叶黄酮平均得率分别为 5．65％、6．54％，高于
其他工艺条件下的黄酮提取量，进一步说明正交试验得出的
最佳条件为提取荞麦茎叶总黄酮较理想的工艺。RSD均小
于1．0％，表明该工艺稳定可行。
精密称定，按试验色谱条件测定峰面积，结果相对标准偏差
<2．0。
2．7 样品测定 分别对样品进行测定，结果表明，1、2、3号
样品芦丁中槲皮素的含量分别为0．813、0．812、0．814 g／m1．
平均为0．813 g／ml。
3 结论
提取溶剂选择甲醇为溶媒，提取时间短，提取杂质少。
用 C 。(250 toni×4．6 mm)色谱柱，流动相为水一乙腈一冰乙
酸(1 060：350：45， V)，流速为1．0 ml／min，检测波长为254
nm。结果槲皮素在4～12 mg／L范围内呈良好的线性关系，
回归方程 Y=1 285X+3 645，平均回收率为 99％。该法简
便，灵敏、准确，重复性好，阴性样品对测定无干扰，可作为质
量和生产控制的有效方法。
参考文献
[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典[S]．北京：化学工业出版社，
2005．
[2]王晖，刘良玉，王林江．HPLC法测定透骨草中槲皮素的含量【J]．江西
．中医学院学报，2005，17(4)：41．
[3]余琳．黄春霞．榭皮素一铝(3)一TWEEN一80荧光体系的研究及其应
用[J]．广东工业大学学报，2001，18(2)：81—84．
[4]余琳．陈梅．榭皮素一锡(av)荧光光度法的研究及应用[J]．分析试验
室，2000，19(4)：53—54．
[5]李梅．紫外分光光度法狈 复方胶囊中银杏叶总黄酮含量[J]．中国医
院药学杂志，1998，l8(2)：85．
[6]王丽琴，党高潮，顾莹．卡尔曼滤波光度法同时测定槐米中芦丁和槲皮
素[J]．药物分析杂志，2000，20(1)：60．
[7]李向军，张裕平，袁倬斌．毛细管电泳法分离测定芦丁、枷皮素和连翘
苷[J]．分析试验室，2003，22(2)：39—41．
3 结论与讨论
采用乙醇振荡提取法，利用正交试验设计研究了乙醇浓
度、物料比、提取时间、浸提温度对甜荞、苦荞茎叶中总黄酮
提取效果的影响。结果表明，虽然提取时间和提取温度的影
响顺序不同，但乙醇浓度和料液比均是其主要影响因素，进
一 步优选得到荞麦茎叶中总黄酮提取的最佳工艺：75％乙
醇，物料比1：25，65 oC振荡提取2 h。与肖诗明等 、贾冬英
等 、李盈蕾等 的最佳提取工艺相比，该方法简单易行，
提取时间更短，提取效率更高，便于推广应用。荞麦茎叶资
源非常丰富，经济易得，值得深入开发利用。
参考文献
[1]詹寿发，陈哗，彭琴，等．九江地区3种荞麦黄酮含量的测定与分析[J]．
江苏农业科学，2009(6)：349—350．
[2]韩志萍，曹艳萍．甜荞麦不同部位总黄酮含量测定[J]．食品研究与开
发，2O05，26(3)：147—149．
[3]赵玉平，肖春玲．苦荞麦不同器官总黄酮含量测定及分析[J]．食品科
学，2O04，25(10)：264—266．
[4]项昭保，任绍光，石轶松，等．吸光光度法测定荞麦秸中总黄酮[J]．理
化检验一 化学分册，2002，3s(9)：436-438．
[5]唐宇，赵钒 荞麦中黄酮含量的研究[J]．四Jj『农业大学学报，2001，19
(4)：352—354．
[6]杨芙莲，梁萍．甜荞麦茎中类黄酮的提取纯化工艺研究[J]．食品研究
与开发，2007，28(z)：54—57．
[7]王玉珠，张萍，李红宁，等．十种栽培苦荞麦生物类黄酮含量的比较研
究[J]．食品研究与开发，2007，28(9)：121—123．
[8]肖诗明，张忠，李勇，等．苦荞麦麸皮中黄酮的提取工艺条件研究[J]．
食品科学，2006，27(1)：156—158．
[9]贾冬英，乔玉兰，谭敏．用正交法探讨苦荞麦茎及籽壳中总黄酮(芦丁)
的乙醇提取工艺【J]．食品科学，1997，18(6)：22—25．
[10]李盈蕾，陈建华．荞麦总黄酮提取工艺研究[J]．安徽农业科学，2008，
36(6)：2201—2202．
