化学消毒剂消毒效果验证方案.doc

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河北瑞晶康生物科技有限公司 ////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////// 编码：VAP-MV-QC14 版本号：00 题目：化学消毒剂消毒效果验证方案 页码：28/28 题目：化学消毒剂消毒效果验证方案 起草人 起草日期 批准人 批准日期 颁发部门 生效日期 领用部门 复印号 分发部门 审核小组成员 姓名 所属部门 职务或职称 审核日期 备注 版本号变更 xx→xx 修订人 原版失效日期 新版生效日期 修订原因 修订内容-原版新版对比 备注 文件修订史： 正文： ★ 目的 为了确认化学消毒剂消毒效果，保证产品质量，特制订本验证方案，进行验证。 ★ 适用范围 适用于化学消毒剂消毒效果的验证。 ★ 职责 1.验证领导小组职责 负责验证方案的审批。 负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。 负责验证数据及结果的审核。 负责验证报告的审批。 负责再验证周期的确认。 2.机械动力部职责 负责组织试验所需仪器、设备的验证。 负责仪器、仪表、量具等的校验。 3.质量控制部/质量保证部职责 负责拟订验证方案。 负责验证所需的标准品、样品、试剂、试液等的准备。 负责取样及对样品的检验。 负责收集各项验证、试验记录，并对试验结果进行分析后，起草验证报告，报验证领导小组。 4.生产管理部职责 负责按照标准操作规程对洁净区进行清洁消毒。 负责根据验证试验结果，修改操作规程。 ★ 内容 概述：消毒是指消灭微生物的繁殖体，化学消毒剂是指能够消灭微生物繁殖体的化学物质。化学消毒剂仅对繁殖体有效，不能杀死芽孢。为保持洁净室的洁净度，洁净室的墙面、天花板、门窗、机器设备等表面以及操作人员双手（手套）等应定期清洁并用消毒剂进行消毒。本公司批准使用的化学消毒剂包括：75%乙醇、季铵盐类消毒液。其中季铵盐类消毒液仅用于不与药品、原辅料、工艺用水等直接接触表面的消毒及水池、地漏液封。对于不同的消毒对象，应使用不同的消毒剂，并制订消毒程序。 本验证具体规定了评价消毒剂消毒效力的生物学检测方法及其效果评价方法。 1.参考文件： 本方案参考了以下标准和指南： 《药品生产质量管理规范（2010年修订）》； 药品GMP指南 消毒与灭菌效果的评价方法与标准 GB 15981一1995 2.通用方法： 下面说明了一些进行记录测试数据工作的通用标准： 保证每一文件是可追溯的，它应有标题，系统参考（例如项目号）。 文件中每个注解、记录等都应该清楚的、易读的、有日期和有签名的。不能使用铅笔而应使用中性笔签字笔记录数据。 每次测试必须是： 以数字化的形式记录结果。 如果在本次测试的格式中并没有描述测试程序，请另外写明测试程序。 附上在测试过程中所产生的打印出来的图，签名并注明日期，写清楚是哪一次测试，如果一次测试中出现多个附件，每个附件应以X-Y形式清楚的表示出来，X为测试次数（用1、2、3……表示），Y为附件个数（用A、B、C……表示），并签名和注明日期。 每次测试应签名和注明日期（执行人和审核人的签名必须出现）。 如果有些测试没有进行，在偏差表中写明为何未执行的原因和预计执行的日期。 在文件中不要使用修正液，修改错误必须使用以下正确的方式： XXXXXX 姓名 XXXXXX 对于不使用的部分，必须如下面所示的划掉，并签字和注明年、月、日。 姓名 日期 3.方案执行时一旦发生偏差验证小组应完成“异常情况报告”，并送交验证委员会主任进行处理。与偏差有关的所有信息应列入偏差表，如有可能，应注明失败原因。 ★验证所需文件资料 资料名称 编号 存放处 备注： 执行人 日期 复核人 日期 ★内容 1.验证前环境、人员、仪器、试剂 环境 目的：确保所在的操作环境能够很好的完成整个方法的验证。 可接受标准：清洁无尘、无振动、无电磁干扰、无腐蚀性气体、通风良好、相对恒温恒湿的环境和局部A级环境。 人员 目的：确保操作人员能够正确完成检验方法验证工作。 可接受标准：操作人员应接受培训，能够完成检验方法操作，并确保检验数据准确。 仪器 目的：确保使用的仪器运作正常且测量数据准确。 可接受标准：所有用到的仪器、玻璃器具应经过计量局的校验。 菌种 目的：确保使用的菌种不影响检验结果的准确性。 可接受标准：所用的菌种信息完整，菌种无变异，且不超过5代。 确认报告： 结果见“化学消毒剂消毒效果验证报告表1” 验证前环境确认； 结果见“化学消毒剂消毒效果验证报告表2” 验证前人员确认； 结果见“化学消毒剂消毒效果验证报告表3” 验证前仪器确认； 结果见“化学消毒剂消毒效果验证报告表5” 验证前菌种确认； 将发现的偏差记录在偏差报告中。 分析方法验证 实验条件 培养基 营养琼脂培养基批号： 玫瑰红钠琼脂培养基批号： 营养肉汤培养基批号： 培养基配制见SOP-012-GWP006《培养基配制、灭菌标准操作程序》 微生物指示剂 目的：选择细菌、真菌中的典型菌种测试消毒剂的消毒效力 操作程序：细菌： 细菌繁殖体：金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大肠埃希菌[CMCC(B)44102] 细菌芽孢：枯草芽胞杆菌[CMCC(B)63501]。 真菌：白色念珠菌[CMCC(F)98001]。 消毒剂 乙醇批号： 季铵盐类溶液批号： 70%乙醇溶液配制：取一定量的95%药用乙醇，倒入配制桶，加灭菌蒸馏水，比例为100：36搅拌均匀即得。 75%乙醇溶液配制：取一定量的95%药用乙醇，倒入配制桶，加灭菌蒸馏水，比例为100：27搅拌均匀即得。 80%乙醇溶液配制：取一定量的95%药用乙醇，倒入配制桶，加灭菌蒸馏水，比例为100：19搅拌均匀即得。 %季铵盐类消毒液配制：取一定量的季铵盐类溶液倒入配制桶，加灭菌蒸馏水，比例为1：281，搅拌均匀即得。 %季铵盐类消毒液配制：取一定量的季铵盐类溶液倒入配制桶，加灭菌蒸馏水，比例为1：256，搅拌均匀即得。 %季铵盐类消毒液配制：取一定量的季铵盐类溶液倒入配制桶，加灭菌蒸馏水，比例为1：220，搅拌均匀即得。 稀释剂 %氯化钠稀释液：氯化钠9g，加水1000ml，溶解，分装，灭菌。 菌液制备 目的：为化学消毒剂消毒效果验证做准备 操作程序 细菌菌液制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基上，30~35°C培养18〜24小时，取此培养液1ml加1%蛋白胨的溶液9ml，采用10倍递增稀释法稀释。 真菌菌液制备：接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23~28°C培养24〜48小时。取此培养物1ml加1%蛋白胨的溶液9ml，采用10倍递增稀释法稀释。 枯草杆菌黑色变种芽孢悬液的制备 取枯草芽孢杆菌新鲜培养物适量至营养琼脂培养基斜面，使菌液布满营养琼脂培养基斜面，再将多余的培养物吸出，将斜面置于30~35°C培养5~7天。用接种环取菌样少许涂与玻片上，进行芽孢染色镜检。当芽孢形成率达95%以上时，即可进行以下处理。否则，应继续在室温下放置一定时间，直至达到上述芽孢形成率后再进行以下处理。 加适量无菌水于每一营养琼脂培养基斜面试管内，以接种环轻轻推刮下菌苔。吸出第一批洗下的菌悬液，再取适量无菌水于营养琼脂培养基斜面，重复洗菌一遍。将第一批洗下的菌悬液集中于无菌三角瓶内，振摇5min，打碎菌块，形成均匀的芽孢悬液。 用无菌纱布过滤芽孢悬液，清除其中的琼脂凝块。 将过滤后的芽孢悬液放于80°C水浴中10min以杀灭残余的细菌繁殖体。 取菌悬液1ml加无菌水9ml，采用10倍递增稀释法稀释。 可接受标准：试验菌菌数约为5×105~5×106cfu/ml。 确认报告： 结果见“化学消毒剂消毒效果验证报告表6” 菌液制备确认； 将发现的偏差记录在偏差报告中。 中和剂鉴定试验 目的：证明中和剂不仅能及时终止消毒剂的杀灭作用，且中和剂本身及其与消毒剂的反应产物尚需对微生物无抑制作用或杀灭作用，对培养基无不良影响。 操作程序 取消毒剂与中和剂混合，制成中和产物溶液。再按下表进行 组号 菌液加于 混匀作用10min 取混匀液加于（加入后总量共5ml） 作用10min后，取原液或稀释液接种平板（2个/样本） 1 消毒剂 稀释剂 原液，×10 2 消毒剂 中和剂 原液，×10 3 中和产物 稀释剂 ×100，×1000 4 稀释剂 稀释剂 ×100，×1000 5 中和剂 稀释剂 ×100，,1000 6 稀释剂 原液 然后倾注平板，细菌30~35°C培养3天，芽孢30~35°C培养5天，真菌23~28°C培养5天，观察最终结果。 注:按稀释倍数计算出回收菌数（cfu/ml） 可接受标准：实验结果符合以下全部条件，所测中和剂可判为合格 （1）3、4、5组平皿中有相似量试验菌生长，其组间菌落数误差率不应超过10%，误差率计算公式如下： 误差率= （2）6组平皿中无菌生长。 （3）2组平皿中菌数明显少于3、4、5组平皿 （4）1组平皿中不长菌或明显少于2组平皿 确认报告： 结果见“化学消毒剂消毒效果验证报告表7”中和剂鉴定试验； 将发现的偏差记录在偏差报告中。 定量消毒试验 目的：对消毒剂杀灭效果进行评价 操作程序 取3支灭菌后的试管，编号，加入待测消毒剂，放20±2℃水浴中。 待试管内液体温度与水浴温度平衡后，在3个试管中分别加入菌悬液，混匀并开始计时。 分别于5分钟、10分钟、20分钟从每个试管中取菌液混合液，加入中和剂混匀，中和10分钟，进行系列10倍稀释，分别吸取样液（原液、稀释液），进行活菌计数，每管样液进行2个平皿。 阳性对照以稀释剂代替消毒液，同时按~操作。 然后倾注平板，细菌30~35°C培养3天，芽孢30~35°C培养5天，真菌23~28°C培养5天，观察最终结果。 注：待测消毒剂为70%乙醇、75%乙醇、80%乙醇、%季铵盐类消毒液、%季铵盐类消毒液、%季铵盐类消毒液、 按不同稀释度推算出每个样本存活菌数（cfu/ml），计算杀灭率。 试验重复5次 可接受标准： 对细菌和真菌的5次试验的杀灭率均≥%判为消毒合格。 确认报告： 结果见“化学消毒剂消毒效果验证报告表8”定量消毒试验； 将发现的偏差记录在偏差报告中。 有机物保护实验 目的：评价有机物对消毒剂的杀菌能力的影响 操作程序 实验前预先向菌悬液中加入供试品溶解混匀，使其最终含供试品量为10%，含菌数为5×105~5×106cfu/ml，以此作为实验菌悬液。 取3支灭菌后的试管，编号，加入适宜浓度消毒剂。放20±2℃水浴中。 待试管内液体温度与水浴温度平衡后，在三个试管中分别加入实验菌悬液，混匀并开始计时。 分别于5分钟、10分钟、20分钟从每个试管中取菌液混合液，加入中和剂混匀，中和10分钟，进行系列10倍稀释，分别吸取样液（原液、稀释液），进行活菌计数，每管样液进行2个平皿。 阳性对照以稀释剂代替消毒液，同时按~操作。 按不同稀释度推算出每个样本存活菌数（cfu/ml），计算杀灭率。 试验重复5次 可接受标准： 5次试验的杀灭率均≥%的最短时间判为该消毒剂在有机物保护的条件下，可以达到消毒的有效时间。 此有效时间与消毒剂定量消毒试验有效时间相同或相近，判为有机物对消毒剂杀菌作用无明显影响。若消毒最短有效时间延长一倍以上者可视为有明显影响。 确认报告： 结果见“化学消毒剂消毒效果验证报告表9”有机物保护实验； 将发现的偏差记录在偏差报告中。 化学消毒剂有效期验证 目的：评价消毒剂在有效期内是稳定的，并且消毒效力不会变化。 操作程序 配制消毒剂后，放置24、36、48、96h，根据、操作程序进行定量消毒实验和有机物保护试验，检测消毒剂放置一段时间后消毒效果。 可接受标准 定量消毒实验：对细菌和真菌的5次试验的杀灭率均≥%判为消毒合格。 有机物保护试验：5次试验的杀灭率均≥%的最短时间判为该消毒剂在有机物保护的条件下，可以达到消毒的有效时间。此有效时间与消毒剂定量消毒试验有效时间相同或相近，判为有机物对消毒剂杀菌作用无明显影响。若消毒最短有效时间延长一倍以上者可视为有明显影响 确认报告 结果见“化学消毒剂消毒效果验证报告表10”消毒剂有效期验证定量消毒试验； 结果见“化学消毒剂消毒效果验证报告表11” 消毒剂有效期验证有机物保护实验 将发现的偏差记录在偏差报告中。 3.偏差管理 偏差清单：列出所有偏差填写“化学消毒剂消毒效果验证报告表12”偏差清单。 偏差报告记录：如有偏差填写“化学消毒剂消毒效果验证报告表13”偏差报告记录。 4.变更控制 变更清单：列出所有变更填写“化学消毒剂消毒效果验证报告表14”变更清单。 变更记录：如有变更填写“化学消毒剂消毒效果验证报告表15”变更报告记录。 5. 确认报告 填写“化学消毒剂消毒效果验证报告表16”验证报告。 6.验证合格证书 填写“化学消毒剂消毒效果验证报告表17”验证合格证书。 化学消毒剂消毒效果验证报告表1验证前环境确认 检查项目 可接受标准 检查结果 项目结论 干扰情况 清洁无尘、无振动、无电磁干扰、无腐蚀性气体。 是□ 否□ □符合 □不符合 安装环境 相对恒温恒湿。 是□ 否□ □符合 □不符合 通风 通风良好。 是□ 否□ □符合 □不符合 操作台 装操作台应稳固。 是□ 否□ □符合 □不符合 A级环境 满足A级环境要求 是□ 否□ □符合 □不符合 偏离情况说明 确认结论 检查人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表2验证前人员确认 序号 姓名 部门/公司 职责 已接受培训? 是/否 签名 日期 确认内容 是 否 所有人员已确认姓名、签名和部门/公司 所有执行本确认的人员已得到培训 偏离情况说明 确认结论 确认人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表3验证前仪器确认 仪器名称 生产厂家 型号 序列号 校准 校准日期 有效期至 偏离情况说明 确认结论 确认人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表4验证前培养基、试剂确认 名称 生产厂家 批号 体积/数量 生产日期 有效期至 中和剂(1%卵磷脂+%吐温80) 偏离情况说明 确认结论 确认人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表5验证前菌种确认 菌种名称 来源 编号 是否变异 传代次数 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表6菌液制备 菌种名称 代数 稀释度 细菌数 （cfu／ml） 霉菌数 （cfu／ml） 稀释度 细菌数 （cfu／ml） 霉菌数 （cfu／ml） 稀释度 细菌数 （cfu／ml） 霉菌数 （cfu／ml） 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 白色念珠菌 枯草杆菌黑色变异芽孢 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表7中和剂鉴定试验 菌种名称 各组回收菌数 1 2 3 4 5 6 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草杆菌黑色变异芽孢 白色念珠菌 误差率 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表8定量消毒试验 消毒剂种类 乙醇 浓度 % 试验次数 配制日期 菌种名称 时间（D） 5min 10min 20min 金黄色葡萄球菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 大肠埃希菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 枯草杆菌黑色变种芽孢 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 白色念珠菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 消毒剂种类 季铵盐类 浓度 % 试验次数 配制日期 菌种名称 时间（D） 5min 10min 20min 金黄色葡萄球菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 大肠埃希菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 枯草杆菌黑色变种芽孢 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 白色念珠菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表9 有机物保护试验确认 消毒剂种类 乙醇 浓度 % 试验次数 配制日期 菌种名称 时间（D） 5min 10min 20min 金黄色葡萄球菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 大肠埃希菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 枯草杆菌黑色变种芽孢 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 白色念珠菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 消毒剂种类 季铵盐类 浓度 % 试验次数 配制日期 菌种名称 时间（D） 5min 10min 20min 金黄色葡萄球菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 大肠埃希菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 枯草杆菌黑色变种芽孢 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 白色念珠菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表10消毒剂有效期验证定量消毒试验 消毒剂种类 乙醇 浓度 % 试验次数 配制日期 菌种名称 时间（D） 5min 10min 20min 金黄色葡萄球菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 大肠埃希菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 枯草杆菌黑色变种芽孢 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 白色念珠菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 消毒剂种类 季铵盐类 浓度 % 试验次数 配制日期 菌种名称 时间（D） 5min 10min 20min 金黄色葡萄球菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 大肠埃希菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 枯草杆菌黑色变种芽孢 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 白色念珠菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表11消毒剂有效期验证有机物保护试验 消毒剂种类 乙醇 浓度 % 试验次数 配制日期 菌种名称 时间（D） 5min 10min 20min 金黄色葡萄球菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 大肠埃希菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 枯草杆菌黑色变种芽孢 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 白色念珠菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 消毒剂种类 季铵盐类 浓度 % 试验次数 配制日期 菌种名称 时间（D） 5min 10min 20min 金黄色葡萄球菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 大肠埃希菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 枯草杆菌黑色变种芽孢 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 白色念珠菌 实验组菌数（cfu） 对照组菌数（cfu） 杀灭率 偏离情况说明 确认结论 检验人 日期 复核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表12偏差清单 偏差号 偏差描述 报告号 执行人 日期 审核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表13 偏差报告 报告号 偏差号 偏差描述 建议的纠正措施 验证人员签名 日期 纠正措施的审核和批准 项目负责人签名 日期 结果评估 验证负责人签名 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表14 变更清单 变更号 变更描述 报告号 执行人 日期 审核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表15变更报告 报告号 变更号 变更描述 验证人员签名 日期 变更的审核 验证负责人签名 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表16验证报告 本验证工作简要描述：（交叉引用验证方案的数据，汇总验证结果） 验证评价和建议： 偏差及整改完成情况： 验证结论： 对测试结果和原始数据进行了审核，并得出本验证的最终结论，为以下： 通过□ 不通过□ 执行人 日期 审核人 日期 化学消毒剂消毒效果验证报告表17化学消毒剂消毒效果验证合格证书 验证合格证书 验证项目名称： 　　　　　　　　　　　　　　　　 验证文件编码： 　　　　　　　　　　　　　　　　 验证项目实施部门： 　　　　　　　　　　　　　　　　 验证项目结论： 　　　　　　　　　　　　　　　　 验证批准日期： 　　　　　　　　　　　　　　　　 再验证时间： 　　　　　　　　　　　　　　　　 河北精晶药业有限公司 质控部 年 月 日 对照组存活菌数 杀灭率（%）= 对照组存活菌数—试验组存活菌数 ×100% 对照组存活菌数 杀灭率（%）= 对照组存活菌数—试验组存活菌数 ×100%