湖南师范大学“国家大学生创新性实验计划”项目申请表
2007-2008 年 1 学期
项目名称 利用转基因斑马鱼研究人 RMND5A 基因的心脏功能
个人申请 □ 团队申请 □ 团队名称 RMND5A 基因心脏功能研
究小组
申请经费 20000 元 起止时间 2007 年 11 月 至 2008
年 11 月
姓名 潘旭明 王沁 陈晓 胡雪晴 蔡娟
年级 2005 级 2005 级 2005 级 2005 级 2005 级
申请
人或
团队
专业 生物基地 生物基地 生物基地 生物基地 生物基地
联系人 陈晓 所在院、专业
生科院
生物基地
联系电话
13467619
157 Email
Chenxiao1620
@
导师 吴秀山 职务/职称 院长/教授 联系电话 8872780 Email
Xiushanwu20
03@
计划时数 100 建议学分 2(每人)
主体设备 斑马鱼养殖系统 注射仪 显微镜 离心机
种类
斑马鱼
饲料
DNA
试剂盒
核酸内
切酶
原位杂
交试剂
盒
抗体
其他试
剂
测序
用量 2 公斤 1 个 4 种 1 个 4 种 10 种 10 次
经费（元） 100 1500 1500 2500 8000 4500 1900
消耗材料
经费预算
总计（元） 20000
申请理由（包括自身具备的知识条件：自己的特长、兴趣等）
我们团队的每一个成员都对生命科学充满着浓厚的兴趣，总以极大的热情去探索未
知的生命之谜。经过两年多的专业学习，我们对生命科学的基础知识有了一定的了解，
对其各个领域也有所涉猎。怀着对心脏发育的共同兴趣，我们组建了 RMND5A 基因心脏
功能研究小组，经过大家的仔细思考研究，吴秀山教授的悉心指导，我们决定借助心脏
发育实验室利用转基因斑马鱼研究人的 RMND5A 基因。
作为生物基地专业的学生，我们已经具备遗传学、分子生物学、发育学等方面的基
本知识，并掌握了相关的基本实验操作技术。五位成员皆能吃苦耐劳，意志坚强，品学
兼优，善于思考，有创新意识。其中两人曾分别获专业一等和二等奖学金，四人有多种
学生干部经历，有较强的分析问题、处理问题的能力和沟通协调能力。一人在心脏发育
实验室已经做过三个多月的前期准备工作，并已熟练掌握质粒载体构建，原位杂交，免
疫共沉淀等实验方法和技巧。一人曾在中科院生物物理所感染与免疫中心，学习过基础
实验方法，基本功扎实。总之，团队构建合理，人员之间经过长期共同实习，配合默契，
具备了一定的科学研究能力。
我们所研究的 RMND5A 基因是一个功能未知的新基因，主要在心脏和骨骼肌中表达，
这个实验室在前期曾采用 RNA 干扰技术，抑制该基因表达，使得斑马鱼围心腔扩大。我
们计划建立一个该基因的转基因斑马鱼稳定系，来研究其功能，此方法将会在该基因的
进一步研究上有很大优势。经过前期准备，目前实验室已具备我们开展研究所需的
RMND5A 基因，cmlc2 心脏启动子，plres2-egfp 质粒载体。
项目
创新
点及
方案
设计
项目创新点：
1．RMND5A 作为人类一个新基因，主要在心脏与骨骼肌中表达，可能与心脏发
育相关，而目前还没有对它的功能进行专门的研究。
2．首次利用斑马鱼作为模式动物研究 RMND5A 这个基因的功能。
3．该研究有可能从生物整体水平上，阐明该基因在心脏中的功能。
利用转基因斑马鱼研究人 RMND5A 基因的功能
基本方案：
1．插入心脏启动子 cmlc2 于 plres2-egfp 质粒载体，构建重组质粒。
2．将 RMND5A 基因插入重组质粒多克隆位点，连入载体。
3．将 cmlc2-RMND5A-ires-egfp 质粒片段切下，纯化回收。
4．将前一步所得片段注入二细胞期或四细胞期的斑马鱼受精卵中，制备转基因个
体。
5．观察筛选具有绿色荧光蛋白的个体。
6．筛选纯合体后代。
7．检测心脏解剖结构等相关指标。
8． 分析试验数据得出结论。（详细附后）
预
期
成
果
1．成功构建重组质粒，并使用 cmlc2-RMND5A-ires-egfp 质粒片断，构建转基
因斑马鱼稳定系，为进一步相关研究打下基础。
2．通过检测转基因斑马鱼稳定系，证明 RMND5A 基因与心脏发育的重要关
系，探讨该基因的心脏功能，进一步弄清心脏发育机制，为心脏病的治疗做出
贡献。
3．团队的每一成员都能通过这次活动，巩固专业知识，提高实验技能，培养
创新能力和科研素质。
实
验
室
意 见
主任签字：
年 月 日
导
师
意
见 签名：
年 月 日
学 院
工
作
组
意 见 签字盖章：
年 月 日
学
校
意
见
签名盖章：
年 月 日
