2.2 抗浅部真菌实验
2.2.1 实验方法:制备沙氏培养基并装入三角瓶
中,高压灭菌。用无菌方法分别取依地红皮肤消毒
剂原液和 10、60、120倍稀释液以及克酶唑癣药水原
液和10、60倍稀释液各 1 ml注入消毒的平皿内,每
个剂量组 5个平皿(平皿直径 10 cm),然后倾人沙
氏培养时接种 3种浅部真菌(直径约0.5 mm的菌
团)。保温37℃,培养 1周,观察菌落生长状态以及
有无杂菌生长,测量菌落直径(mm)并与对照皿比
较。
2.2.2 结果:依地红皮肤消毒剂对浅部真菌红色
毛癣菌、石膏样毛癣菌、絮状毛癣菌均有明显的抗菌
表3 依地红抗浅部真菌效果(_x±s,n=5)
空白组 一
YDH 原液
YDH 1/10
YDH 1/60
YDH 1/120
KMZ 原液
KMZ 1/10
KMZ 1/60
5 30,2±2.8
5 0
5 0 ¨
5 0.26±1.8
5 25,6±1,3
5 0,6±0.3 ¨
5 0.8±0.4”
5 3l_2±l_6
25,6±2,0
0
0 ¨
0.30±1.6
22.3±1.5
0 ¨
0.8±0.4 ¨
23.8±2.6
22.6±l_0
0料
0I1
0,16±2,6
21,0±3.2
0.8±0.3
1.0±0.1“
22.5±1.3
YDH:依地红皮肤消毒剂;KMZ:克酶唑癣药水
作用,使菌落缩小。依地红皮肤消毒剂的抗真菌作
用明显大于克霉唑,克霉唑癣药水稀释 60倍时,其
抗菌作用已经消失,菌落大小接近空白对照组,而依
地红皮肤消毒剂稀释60倍的仍有很强的杀菌能力
(P<0.01)。结果见表 3。
3 讨论
中药镇痛作用的多靶点 、多层次机制,在疼痛治
疗中具有一定的优势,故加强镇痛中药的研究开发
有益于疼痛的治疗。本实验的研究证明依地红皮肤
消毒剂的中、高剂量能明显提高大鼠的甩尾时间、减
少小鼠的扭体次数,为依地红皮肤消毒剂的临床应
用提供了药理学依据,并为今后深入研究奠定基础。
浅部真菌感染由不同的皮肤癣菌感染而致,中
医治疗癣症强调以外治为主。依地红皮肤消毒剂作
为一种外用制剂,对皮肤癣菌有明显的杀灭作用,建
议在临床上进一步推广应用。
参 考 文 献
[1]江苏新医学院.中药大辞典.上海:上海科学技术出版
社 ,2001:2643-2644.
[2]靳小青,钮燕,刘长翠,等.依地红皮肤消毒剂对足癣的
临床效果 .海军医学杂志,2003,24(1):60-61.
[3]Gyires K,Torma Z.The use of the writhing test on mice
for screening different types of analgesics.Arch Int hnr_
macodyn,1984,267(1):131—134.
(2006—02—15收稿)
沙溪凉茶的药效学研究
刘建雄 ,吴清和 ,方燮帆 ,黄 萍 ,商丽华 ,胡卓平
(1.广东益和堂制药有限公司,广东中山528471;2.广州中医药大学,广东广州510405)
摘要 目的:对沙溪凉茶的药效学进行研究,对其有效性作出科学评价。方法:采用动物随机分组,设给药组、
空白对照组和阳性对照组,选择广东凉茶、阿斯匹林、阿托品为阳性对照药物。结果:对干酵母引起的发热有明显
降低体温的作用,对呼吸道和消化道感染常见九种细菌均有不同程度的抑制作用。其中对金葡萄球菌,乙型溶血
性链球菌、白喉杆菌抑制作用较强;对柯萨奇B族病毒(COX—B )和甲 型流感病毒有抑制作用;并具有抗炎、镇痛、
解痉的作用。结论:沙溪凉茶具有清热解毒、导滞除湿的功效,应用于预防和治疗四时感冒和作为清凉饮料使用是
安全有效的。
关键词 沙溪凉茶;解热;抗细菌抗病毒;抗炎
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:10014454(2006)09-0957-04
沙溪凉茶系列产品收载于《部颁标准》十四册
(颗粒剂)和十九册(煎煮茶剂和袋泡茶剂)。原方
来源于民间古验方《广东医药工业志》,其中记载本
中药材第29卷第9期2006年9月
方始于清朝末期;《沙溪镇志》亦记载本方始创于
1885年。沙溪凉茶一百多年来在广东民间广泛流
传使用,并通过华侨同胞的传送达东南亚和南美等
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地区。在广东众多的凉茶品种中,沙溪凉茶是唯一
的一个中药保护品种。该配方已被认定为广东省食
品文化遗产。
沙溪凉茶主要由岗梅、金钮扣、蒲桃、臭茉莉和
野颠茄等组成,这些药物全为广东草药,具有浓厚的
广东用药特色。方中重用岗梅为主药,性味甘微苦
寒,功效清热解毒,利咽生津,用于治疗感冒、高热、
咳嗽、喉炎或作清凉饮料⋯。《岭南采药录》说岗梅
“清热毒,煎凉茶多用之”。金钮扣、蒲桃性味均为
甘、微苦、微寒,功效清热解毒,化痰止咳。民间多用
于咽喉肿痛,咳嗽痰多;臭茉莉性味甘、微苦、平,功
效祛风利湿,化痰止咳,多用于痰湿内阻。野颠茄性
味辛散、苦微温,功效止咳平喘,消肿止痛,兼能辛散
表邪。诸药合用,共起清热解毒,除湿导滞的功效,
用于治疗四时感冒、身倦骨痛、寒热交作、胸膈饱滞、
痰凝气喘等。对外感热病初起,效果尤佳。本文通
过药理实验研究,阐述其药效结果。
1 材料
1.1 实验动物 sD系大鼠(合格证号:98A017),
NIH系小鼠(合格证号:98A018),新西兰大白兔(普
通级,检证字92006)均购 自广东省卫生厅医用动物
场。
1.2 主要药品 沙溪凉茶取净药材,按配方配齐
各药,加水煎煮两次,过滤低温浓缩。每克浸膏含生
药 20.6克,广东益和堂制药有限公司产品,批号:
990601,使用时以蒸馏水配成所需浓度。阳性药物
选择功效和主治相似的广东凉茶,解热、镇痛、抗炎
解痉作用确切的阿斯匹林、阿托品,抗病毒作用确切
的病毒唑等。阿斯匹林,桂林市制药厂产品,批号:
980305;硫酸阿托品,广东江门制药厂产品,批号:
971208;广东凉茶,广州羊城药业股份有限公司产
品,批号:980509;病毒唑,广东石岐制药厂产品,批
号:990125。
1.3 主要试剂及仪器 冰乙酸:分析纯,进口分
装,广东医药站化学公司经销。干酵母 :法国 Marcg
公司产品(进口分装)。乙酰胆碱分析纯:军事医学
科学院药材供应站提供。酚红:上海试剂三厂。722
型光栅分光光度计:上海第三分析仪器厂产品。
3500型酶联免疫检测仪:美国 Bio.Rad产品。O.
LYMPUS倒置显微镜 :日本产品。HW0301T-VBA型
培养箱:Harris产品。
1.4 剂量设置 沙溪凉茶按临床量的5倍、10倍、
20倍(大鼠),或10倍、20倍、30倍(小鼠)分别设立
3个剂量组,剂量以浸膏重量(g)表示,阳性药物剂
量按该试验中受试药物最大倍数(广东凉茶以生药
量表示),根据临床剂量换算。
2 方法与结果
2.1 干酵母所致大鼠发热的影响 选取健康大
白鼠,雌雄各半,让其在实验室环境适应 3天,每 日
测量肛温 2次,第 4天实验时取体温变化不超过
0.3~C的大鼠,在测量正常体温(肛温)2次后,于大
鼠背部皮下注射20%的干酵母悬液 10 ml/kg体重。
选择于第 6 h后体温上升 0.8cc以上的大鼠60只,
随机分组,分别灌胃给药,对照组给予等量蒸馏水。
于药后 1、2、3、4 h各测体温 1次,比较各组动物体
温下降值的差异。结果沙溪凉茶高剂量给药后3、4
h可使体温明显下降(P<0.01),中剂量给药后 1、
3、4 h有明显降低体温作用(P<0.05~0.01);低剂
量对干酵母引起的大 白鼠发热无明显影响 (P>
0.05);阿斯匹林给药后 1、2、3、4 h均有明显的解热
作用(P<0.01)。见表 1。
2.2 抗细菌实验(体外抑茵试验) 选用九种
有代表性的,主要是呼吸道和消化道感染的常见病
原菌和条件致病菌,包括金黄色葡萄球菌、乙型溶血
性链球菌、肺炎球菌、肠炎杆菌、痢疾杆菌、白喉杆
菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌。菌种均来 自
北京卫生部生物制品研究所。实验时,用肉膏汤将
沙溪凉茶和广东凉茶配制成每 1 ml含生药量0.20
g、0.05 g、0.025 g⋯⋯共六个药物浓度,每管总量 1
ml,流通蒸气灭菌。对链球菌的试验尚需在灭菌药
液中添加 1%葡萄糖,对肺炎球菌和白喉杆菌则另
加 10%兔血清,对白色念珠菌的试验应用沙氏培养
表1 沙溪凉茶对干酵母致热大白鼠的解热作用(i 4-s)
注:与对照组比较, P<0.05,一 P<0.01(下同)
· 958- 中药材第 29卷第 9期 2006年 9月
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液稀释药液。空白对照为不含药物的培养基。每排
药液的各个浓度管及空白对照管分别加入 1:2000
的试验菌液(8 h培养物)0.1 ml、37clC培养 18 h观
察结果。对白色念珠菌的试验则用 24 h培养物,药
液加菌液后培养 36 h观察结果。判定最小抑菌浓
度(MIC)。结果沙溪凉茶对所试菌种,包括引起呼
吸道和消化道感染的常见致病菌和条件致病菌均有
不同程度 的抗菌作用,对各菌 的最小抑菌浓度
(MIC)介于0.05 g/ml~0.20 g/ml之间,其中对金
黄色葡萄球菌 、乙型溶血性链球菌、白喉杆菌的作用
略强。广东凉茶也有相似的抑菌作用。见表 2。
表2 沙溪凉茶的抑菌作用
注 :空 白对照管 的试验 茵种生长正常
2.3 沙溪凉茶的抗病毒作用(体外抗病毒 实
验) 选用常见引起呼吸道和消化道感染的 5种
病毒,呼吸道合胞病毒(RSV)、3型腺病毒(Adv )、
I型疮疹病毒(HSV-I)、柯萨奇 B族病毒(COX.
B。)、甲 型流感病毒,细胞为 Hep-2细胞、A549细
胞、BHK细胞,上述病毒和细胞均由广州市儿童医
院病毒室提供,将药物配制成每ml含 1 g的浓度,
高压消毒,4~C冰箱保存备用。测定药物对细胞的毒
性作用,将沙溪凉茶和广东凉茶均按 100 mg/ml、50
mg/ml、25 mg/ml、12.5 mg/ml、6.25 mg/ml、3 mg/
ml、1.5 mg/ml稀释,分别接种 Hep-2细胞、A549细
胞、BHK细胞,显示对三种细胞药物的最低毒性剂
量为 12.5 mg/rnl,6.25 mg/ml完全无毒性作用。实
验时药物浓度用10 mg/ml。滴定病毒 TCID如(半数
感染量),选用 100~200个 TCID 剂量与药物进行
中和试 验。RSV 为 10 ,Adv 为 10 ,HSV.I为
10 ,COX-B.为 10~,甲 型流感病毒用 8个血凝单
位(相当10 )。实验时,将病毒与不同稀释度药物
(10 mg/ml、5 mg/ml、2.5 mg/m1)混合,室温作用 1
h,接种于细胞管内同时设病毒和细胞对照管,逐 日
观察细胞病变,待病毒对照管出现++以上后24 h
判断结果,若药物能保护细胞不出现病变,则认为该
剂量对某病毒有抑制作用。RSV、Adv 、HSV.I、
COX-B 用细胞病变作为结果判断标准,甲 型流感
病毒用血凝抑制试验,病毒被完全抑制判断结果。
结果显示沙溪凉茶在 10 mg/ml浓度可抑制柯萨奇
B族病毒(COX-B.),广东凉茶和病毒唑对COX.B.
无抑制作用;沙溪凉茶和广东凉茶在 10 mg/ml浓度
均可抑制甲 型流感病毒,病毒唑在10 mg/ml浓度
可部分抑制甲 型流感病毒。
2.4 抗炎作用 选取健康雄性小鼠,体重为20
~ 22 g,随机分组,于给药后由小鼠尾静脉注入 2%
伊文思蓝生理盐水溶液0.1 mg/10 g体重,同时于
中药材第29卷第9期2006年9月
腹腔注射0.8%醋酸生理盐水溶液 0.2 ml/只,20 h
后断头放血处死小鼠,剖开腹腔用适量的生理盐水
反复冲洗,并收集洗出液,滤纸滤过,并调整容积至
10 ml,于722型光栅分光光度计中(波长 590 nm)
测定OD值,比较各组的差异。结果沙溪凉茶高、
中、低剂量均能显著抑制醋酸所致小鼠毛细血管通
透性增高(P<0.05~0.01);阿斯匹林亦可显著抑
制醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高(P<0.01)。
见表 3。
表 3 沙溪凉茶对醋酸所致小鼠腹腔毛细
血管通透性增高的影响( ±S)
2.5 镇痛作用(3 J 选取健康雄性小鼠,体重20~
22 g,随机分组,禁食 12 h后灌胃给药,于药后 1 h
腹腔注射0.8%醋酸生理盐水溶液 0.2 ml/只,观察
记录20 rain内小鼠的扭体次数,结果显示高、中、低
剂量均能显著减少醋酸所致小鼠扭体数(P<
0.01)。见表4。
表 4 沙溪凉茶对醋酸所致小鼠扭体反应的影响( ±S)
2.6 对兔离体痉挛回肠平滑肌的影响 取 2 kg
左右新西兰大白兔,用木槌击枕骨处死,立即剖开腹
腔,取空肠和回肠上段,置入盛有充氧的冷台氏液
中。沿肠壁分离肠系膜,用台氏液将内容物冲洗干
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净,剪取2~2.5 om的肠断,结扎两端,分别系于通
气钩和负荷2 g的换能器上,连接生物信号采集系
统。观察正常肠肌运动,描记一段肠肌正常运动曲
线,然后依次向浴槽中滴加各种药液,每加药液前冲
洗肠肌2~3次,待舒缩恢复到用药前水平再加入下
组药液,描记舒缩曲线。结果显示,高、低剂量对正
常兔离体肠肌运动有明显抑制作用(P<0.01);对
乙酰胆碱引起的兔离体肠平滑肌痉挛有显著的抑制
作用(P<0.01);对阿托品引起的兔离体肠平滑肌
松驰有明显的协同作用(P<0.05~0.01)。见表5。
表5 沙溪凉茶对兔离体肠平滑肌的影响( ±S)
注:与正常组 比较,一 P<0.01;与阿托品组或乙酰胆碱组 比
较, P<0.05, P<0.01。
2.7 对小鼠气管段酚红排泌量的影响 选取健康
小鼠,雌雄各半,灌胃给药或蒸馏水,0.5 h后腹腔
注射酚红0.1 ml/10g体重,0.5 h后处死动物,剪下
自甲状软骨下至气管分支处的一段气管,放进盛有
2 ml生理盐水的试管中,加入0.1 ml NaOH液,另取
酚红制成含酚红0.01 ml、0.1 g/ml、0.5 g/
ml、0.7 g/ml、1 g/ml、3 g/ml、5 g/ml,用分光光
度计在546 nm处测定OD值,用标准曲线计算出每
鼠酚红排泄量,结果显示,各组均可增加小鼠气管酚
红的排泌量,以高剂量最为明显(P<0.05)。见表
6。
表 6 沙溪凉茶对小白鼠气管段酚
红排泌■的影响( ±S)
3 讨论
广东气候环境湿热,饮凉茶已变成了岭南的一
种特色文化。凉茶是以中医理论为基础的中草药配
方,它是一些具有中医药知识的人长期实践配伍创
造出来的,根据成份不同而具有不同的功能。沙溪
凉茶是以清热解毒、解暑祛湿、消滞为主要功能,其
药性平和,不含大苦大寒药物,饮后口舌甘凉,根据
药效学实验结果显示其有解热、抗菌、抗病毒、抗炎
镇痛、调节肠胃运动和化痰的作用,平常老百姓用其
解除因感冒引起的发热、周身骨痛、发冷发热、胸膈
饱滞、痰凝气喘和用于预防感冒或作清凉饮料,药效
学实验结果与平常使用是相吻合的,因此沙溪凉茶
虽历经一百多年,但疗效确切,已成为粤港澳等地区
各界人士喜爱的清暑佳品。按说明书正确服用沙溪
凉茶,在炎热的南方确能收到防病治病和清凉愉悦
的效果。
参 考 文 献
[1]广东中草药选编小组编.广东中草药.1969:336-337.
[2]徐叔云.药理实验方法.第二版.北京:人民卫生出版
社 ,1991:713-1416.
[3]中华人民共和国卫生部药政管理局 .中药新药研究指
南 .67-80.
(2006—02—15收稿 )
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· 960· 中药材第29卷第9期2006年9月
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