NEB产品知识和市场(ppt)-NEB产品知识和市场.ppt

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NEB 产品知识和市场培训 2001年8月 市场与技术支持部 第一部分 NEB厂家背景回顾 美国总部： Beverly, MA 1975~2001 支柱产品——工具酶 先进的基因克隆和高 表达体系的构建技术 120种自主开发的酶 60多种酶是由NEB首先筛 选到并进入商品化生产 二十五年的生产历史 国际化的生产和营销网络  在全世界35个国家和地区有分销商  美国、英国、德国、加拿大四个生产基地 专业水准的厂商  发酵中心——生产部  酶制备和DNA重组技术中心——研发部  分子生物学和寄生虫学研究中心——基础研究院 第二部分 NEB 产品讲解 核酸工具酶 DNA限制性内切酶 DNA聚合酶、逆转录酶 Vent系列的PCR聚合酶 DNA/RNA修饰酶 单位的定义单位的定义 在50l反应体系中，1小时内，完全消化1g的DNA所 需要的酶量为1 Unit 包装与规格包装与规格 常用酶大多数为10 U/l 缓缓 冲冲 液液 4种不同颜色标记的标准缓冲液和特定缓冲液 稀稀 释释 液液 分为A、B、C三种，依表询 储储 藏藏 条条 件件 在不被稀释的情况下，可长期存放在 零下20度长达20之久 DNA限制性内切酶 严格的质量检验：严格的质量检验： 非特异性的内切酶活性检测 核酸酶污染检测 外切酶污染检测 蓝白斑筛选检测 DNA限制性内切酶 针对于常用在克隆实验中的酶 检验过量酶切对DNA末端的完整性是否有破坏 NEB自主克隆的酶基因 从重组菌株中提纯的酶 随酶另附一管BSA 酶识别位点被dam或dcm甲基化后不能被切动 酶是否耐热 经过蓝白斑法检测 目录书中出现的标志符号的含义 最佳的工具酶反应温度 酶所对应的缓冲液编号 DNA限制性内切酶 Homing 核酸内切酶 识别12-40碱基的长的、对称识别位点的稀有内切酶  同裂酶的概念 识别同一酶切位点的一组内切酶  BSA的作用 酶保护剂，在反应中保证酶具有最佳的活性 DNA限制性内切酶 小常识： NEB限制性内切酶的卖点： 种类非常齐全，（丰富的稀有酶） 稳定性好，存放时间长 价格在进口酶类里适中 质量可靠 DNA限制性内切酶 DNA/RNA聚合酶 DNA或RNA的探针标记 3’末端和5’末端的补平 3’末端的碱基置换 DNA测序反应、定点突变和转录 3’末端突出的切平 特 性：以单链DNA或RNA为模板，从5’端向3’端合成新链 应 用 性能指标： • 5’端向3’端的外切活性 • 3’端向5’端的外切活性 • 聚合速度 • 错配率 • 耐热性 • 延伸能力 常用的种类： • DNA Polymerase I • Klenow Fragment （3’—5’ exo-） • T4 DNA Polymerase • Terminal Transferase • M-MuLV Reverse Transcriptase • *M-MuLVReverse Transcriptase （RNase H-） • T7/Sp6 RNA Polymerase DNA/RNA聚合酶 NEB Vent系列聚合酶 Vent DNA Polymerase 主要应用：常规PCR扩增 双脱氧法测序 NEB Vent系列聚合酶 Vent DNA Polymerase 与常规Taq酶的错配率比较 卖点： 高保真 耐热性非常好 DNA/RNA 修饰酶 DNA / RNA Modifying Enzyme 连接酶 …………………………Ligase 激酶 ……………………………Kinase 碱性磷酸酶 ……………………Phosphatase Beta琼脂糖酶 …………………Agarase 甲基化酶 ………………………Methylase 核酸酶 …………………………Nuclease 外切酶 …………………………Exonulease 内切酶 …………………………Endonulease recA重组蛋白酶………………recA Protein DNA/RNA 修饰酶 重点产品： T4 DNA Ligase 单位定义：20000 NEB Unit = 300 Weiss Unit 4000 NEB Unit = 60 Weiss Unit T4 Polynucleotide Kinase （T4 PNK） 对DNA5’末端进行磷酸化，用于探针标记或克隆 Alkaline Phosphatase, Calf Intesinal （CIP） 去除DNA 5‘和3’的磷酸基团，用于制备5‘的置换 标记和载体克隆，阻止载体的自我连接。 分子量标准 DNA分子量标准 常用类型：整数分子量的 Marker 1kb DNA Ladder 2-log DNA Ladder 100bp DNA Ladder NE W 噬菌体DNA和质粒DNA 酶消化型的DNA分子量标准 非整数型的 DNA分子量标准 DNA分子量标准 PGF 分子量标准 DNA被包埋在凝胶中，以注射器的形式包装 用于几十kb至上千kb的DNA分离时的Marker 脉冲电泳分离 分子量种类： • Low Range • MidRange • Lambda Ladder • Yeast Chromosome RNA 分子量标准 适用于普通凝胶或变性胶 条带为整数的分子量 RNA分子量标准 蛋白分子量标准 蛋白分子量标准 普通型…………2-212kDa （精确） 预染型…………6-175kDa （估计） HRP蛋白Marker检测包 -165kDa （Biotin标记，Biotin Ab） 蛋白工具酶 蛋白酶 内切糖苷酶 外切糖苷酶 蛋白激酶和抑制剂 蛋白磷酸化酶和抑制剂 Factor Xa Protease 探针标记 杂交检测 NEBlot Kit 随机引物法探针标记试剂盒 下游应用： • 文库筛选 • Southern / Northern • 原位杂交卖 点： 标记的dNTP参入率高 模板用量在25ng到2ug 半小时即可完成标记反应 可用于多种类型的标记 dNTP（同位素或非同位素标 记） NEBlot Phototope Kit 随机引物法生物素生物素探针标记试剂盒 用于化学发光检测 与Phptotope-Star Chemiluminescent Detection Kit配合使用 生物素标记的探针稳定，可长时间存放 杂交后可洗脱下来，进行反复杂交 Phptotope-Star Chemiluminescent Detection Kit 卖 点： 灵敏度同位素检测法相当 曝光时间短，只需10-70分钟 信号稳定，可通过改变曝光 时间来摸索最佳的信号强度 第三部分 NEB 蛋白表达产品介绍 1. pMAL 蛋白融合表达 2. 与纯化系统 卖 点： 生产级别的应用 高水平表达量－ 1升培养上清可达到100mg 的蛋白产量 与MBP融合表达可以增加 蛋白的溶解性 1. IMPACT蛋白表达 2. 与纯化系统 卖 点： 应用了蛋白内含肽自我剪 切技术 无需蛋白酶去除标签，只 需一次过柱纯化过程 Intein可接在蛋白的C端或 N端 IMPACT-CN System IMPACT-TWIN System 卖 点： 应用了蛋白内含肽自我剪 切技术，将两个Intein接 在目的蛋白的两端。 无需蛋白酶去除标签，只 需一次过柱纯化过程 Intein行使剪切功能后， 可在目的蛋白两端产生带 S的氨基和羧基，可环化， 可标记 第三部分 NEB英文目录附录的内容介绍 NEBcutter 内容一 分子生物学数据库索引 REBASE 限制性内切酶数据库 3100种限制性酶的相关信息 酶的基因序列、甲基化敏感位点、结构…… 5600篇参考文献 InBase 内含肽数据库 分子生物学数据库网址总汇 224个网址 可按功能领域分类查找 内容二 工具酶常用查询表 以酶识别序列分类的索引 同裂酶索引 限制性内切酶的发展历史和知识背景 NEBuffer的酶 － 活性对照表 双酶切缓冲液选择表 酶－稀释液对照查询表 限制性酶在引物延伸反应中的活性表 限制性核酸内切酶的热失活对照表 酶切反应酶用量查询表 补平反应新酶识别位点查询表 相同粘端酶查询表 限制性酶识别位点中甲基化位点查询表 内容三 分子生物学常用工具表 常用菌株表型及基因型查询表 常用遗传标记 NEB菌株描述 遗传密码表 氨基酸化学结构 常用单位换算 常用载体上的酶识别位点出现频率 常用载体的酶切图谱 内容四 分子生物学实验Protocol 琼脂糖包埋的DNA的限制性酶消化 基因组酶消化的选择指导 甲基化酶反应 第五部分 NEB 销售统计分析 单位：万美金 QIAGEN Clontech NEB 分子生物学试剂产品销售比例 统计 ~ ~ ~ NEB产品种类销售统计 7% 62% 12% 7% 7% 5% 0% XS Enzyme Restriction Enzyme Modifying Enzyme DNA Marker Protein Marker Protein Expression Others 比去年同期 增长一倍多 Takara LTI (Gibcol-BRL) Promega Roche MBI 华 美 国 内 竞 争 对 手 市 场 价 格 比 较