(农业畜牧行业)最新《东
北农业大学学报》写作模板
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整篇文档正文 5号宋体,壹级标题 4号宋体,倍行距。
XXXXXXX的研究
王小虎 1,李小三 2*,宋玉 3
(1.东北农业大学农学院,哈尔滨 150030;2.东北农业大学大学生命科学学院,
哈尔滨 150030;
3.黑龙江八壹大学园艺学院,黑龙江大庆 161090)
摘要:利用长期施用长残留除草剂咪唑乙烟酸的土壤,采用高压富集的方法,从俩种培养液
中共分离出 3株细菌,根据菌株的形态特性和生理生化特征,对此 3 个菌株进行了初步鉴定:
菌株 X为丙酸杆菌属(Propionibacterium);菌株 Y为海球菌属(Marinococcus);菌株 Z
为酸单胞杆菌属(Acidomonas);菌株 X、Y 和 Z 的最适生长温度分别是 30、30和 35℃;菌
株 X和 Z于中性偏酸的培养基中生长较好,菌株 Y于偏碱培养基中生长较好;菌株 X、Y、Z
生长最适合的葡萄糖含量分别为 %、1%和 %;菌株 Y 生长最适咪唑乙烟酸的浓度是
.·L-1,菌株 X和 Z生长最适咪唑乙烟酸的浓度是 .·L-1。
关键词:咪唑乙烟酸;降解菌;富集分离;鉴定;生长特性
中图分类号:;X172文献标志码:A
Separationidentificationandgrowthcharactersofh
erbicideimazethapyrdegrading-bacteria
WANGXiaohu1,LIXiaosan2,SONGYu3
(,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150010,China;
,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,China;
,HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity,
DaoqinHeilongjiang161090,China)
收稿日期:
基金项目:
作者简介: 姓名(出生年-),性别,职称,学历,研究方向为 。E-mail:
*通讯作者:姓名,职称,博士生导师,研究方向为 。E-mail:
Commented [微软用户 1]: 题目:一般不超过 20 个字
Commented [微软用户 2]: 通讯作者标注*,本刊规定
只能是第一作者导师才可以担任通讯作者。其他情况以同
等贡献者在正文后注明。
Commented [u3]: 页:2
省会城市不必写省份
Commented [微软用户 4]: 中文摘要 200 字左右,应
有独立性和自含性,采用第三人称定法,不用“本文”、“作
者”等主语。不应出现图表、数学公式和非公知公用的符
号、缩略语;研究报告一般用报道性摘要,其内容为目的、
方法、结果和结论。
Commented [微软用户 5]: 关键词:(4~8 个字)
Commented [微软用户 6]: 中图分类号:按中国图书分
类法给出本篇文章的中图分类号。
Commented [微软用户 7]: 英文题目第一个单词首字
母大写,其他单词除均小写(专有名词除外)。
Abstract:Usingthehighpressureenrichmentmethod,threebacteriastrainsintwoculturem
ediawereseparatedfromsoil,whichcontainedtheherbicideimazethapyrandwerelongpollu
,strainXwasidentified
asPropionibacterium,strainYwasidentifiedasMarinococcu,andstrainZwasidentifiedas
eratureforgrowthofX,YandZwere30,30,and35
℃,,b
utstrainYwasappropriatetogrowthunderalkalescence;theoptimalsugarcontentsforgrow
thofX,%,1%%,
.·L-1,.·L-1.
Keywords:imazethapyr;degradingmicroorganisms;enrichmentseparation;identificatio
n;growthcharacters
除草剂咪唑乙烟酸(Imazethapyr)是由美国氰胺公司(现归且为德国 BASF公司)于 80年
代初开发研制的大豆田选择性苗前、苗后早期除草剂,主要防除稗草、反枝苋等壹年生禾本
科杂草和阔叶杂草。咪唑乙烟酸具有杀草谱广、选择性强、活性高等优点,它能够被植物的
叶片和根系吸收,于木质部和韧皮部内传导,积累于分生组织[1-2]。其作用方式是抑制乙酰
乳酸合成酶(AcetolactateSynthase,ALS),破坏蛋白质合成,使植物生长受抑制而死亡。
而豆科植物吸收咪唑乙烟酸后,于体内很快被分解,因此是大豆田优良的除草剂[3-4]。其于
黑龙江省应用尤其广泛,2005年总用量为 3905t,应用面积达到 ×104万 hm2,占大豆田
除草剂面积的 70%,至今因品种竞争和残留限制问题其用量有所下降,但仍然是大豆田的主
导品种[5-6]。残留于土壤中的低量咪唑乙烟酸残易对水稻、马铃薯、甜菜、油菜、番茄、甘
蓝等敏感的后茬作物产生药害[7],严重影响了黑龙江省种植业结构的调整和换茬轮作,已成
为亟待解决的农业生产问题。
咪唑乙烟酸于土壤中降解主要受微生物影响,目前,有关咪唑乙烟酸方面的降解微生物筛选
及生物降解的研究仍未见报道。本研究立足大豆田咪唑乙烟酸的使用情况,针对咪唑乙烟酸
残留的问题,筛选出能够高效降解咪唑乙烟酸的微生物,对其进行鉴定、驯化和培养,且进
壹步研究其降解效果以及生物降解菌剂等,旨于解决咪唑乙烟酸的残留药害问题,力争延长
这壹大豆田优良除草剂品种的使用寿命,同时为该除草剂环境污染的治理开辟壹条有效的途
径,为农业的可持续发展提供有效的技术保障。
1材料和方法
菌种
供试药剂
%咪唑乙烟酸原药,哈尔滨利民农化 XX 公司提供;5%普施特水剂,购自德国巴斯夫公司。
供试土壤
采自东北农业大学香坊农场长期施用过长残效除草剂咪唑乙烟酸的土壤。
供试培养基
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基:用于细菌培养,主要成分有牛肉膏 3g、蛋白胨 5g、琼脂 18g、蒸
馏水 1000mL,~;富集培养液:用于微生物筛选,主要成分有牛肉膏 3g、蛋白胨
5g、NaCl5g、K2HPO45g、蒸馏水 1000mL,~;平板计数琼脂培养基:用于细菌计数,
主要成分为蛋白胨 5g、酵母膏 、葡萄糖 10g、琼脂 13g、蒸馏水 1000mL,~。
方法
咪唑乙烟酸降解细菌的富集分离
于 250mL的三角瓶中,加入 100mL 富集培养基(含咪唑乙烟酸浓度为 .·L-1),将采
Commented [微软用户 8]: 英文摘要内容与中文内容
一致。
Commented [微软用户 9]: ①引言的内容主要包括研
究的目的、意义、主要方法、范围、背景、相关领域的前
人研究历史与现状等。
②其次是理论依据和实验设备基础、预期目标、本课题在
学科领域中所占的地位、对他人已有成果的评价及相互关
系、新概念和新术语的定义等等。这些内容可根据具体情
况进行取舍,不必逐一作答或涉及。
③写作要求突出重点。引言应言简意赅、开门见山,各项
内容只需一语道破;一般教科书上已有的知识,或人所共
知、显而易见的功用或意义,在引言中不必赘述,重点写
好目的、意义和背景。
④引言不宜太长。
Commented [微软用户10]: 参考文献在文章顺序编码,
序号之间以“-”连接,标注序号上标。
Commented [微软用户 11]: 单位与数字之间空半格。
集的土样 10g接入到培养液中,设置 3 次重复,置于 30℃,转速为 150r·min-1的摇床上振荡
培养,7d后按 10%的接种量取培养液将其移入含咪唑乙烟酸浓度为 .·L-1新鲜培养
基中,继续培养 7d;以后每隔 1 周均从上次的培养液中取出 10mL 加入到 100mL 新鲜培养基
中,咪唑乙烟酸的浓度每次增加 .·L-1,直至增加到 .·L-1,共富集培养 6
次;然后转入到基础盐培养基中进行筛选,共进行 3 次,培养基中咪唑乙烟酸的浓度分别为
800、1000和 .·L-1。然后取样,于牛肉膏蛋白胨培养基上按细菌菌落形态、颜色
进行单个菌落分离,挑出单细菌菌株分别进行纯化培养且保存。最后选择于含咪唑乙烟酸的
牛肉膏蛋白胨培养基平板中能够大量生长的菌株作为目标菌株进行研究。
降解细菌的鉴定
形态鉴定
将各株细菌进行简单染色、革兰氏染色、荚膜染色、芽孢染色和鞭毛染色,于显微镜下进行
镜检,作形态观察和描述。
生理生化鉴定
通过接触酶、葡萄糖氧化发酵、甲基红、淀粉水解、硝酸盐仍原、乙醇氧化、明胶液化、反
硝化、柠檬酸盐等来进行鉴定试验,鉴定至属[8-10]。
降解细菌生长特性的研究
通过于不同异草酮初始浓度、不同温度、不同 pH及不同外加碳源量的条件下,对这 3种降
解菌进行生长量的研究,以确定降解菌的最适生长条件。以波长为 650nm处的 OD值表示菌
体生长量。
2结果和分析
降解咪唑乙烟酸细菌的富集分离和鉴定
咪唑乙烟酸降解菌的分离
按照上述富集筛选降解菌株方法,经过 40d 的富集培养液培养,且转入基础盐培养基继续筛
选培养 20d,取最后筛选培养液,经 10 倍稀释法,将 10-4、10-5、10-6的培养液稀释液分别
转至牛肉膏蛋白胨培养基平板上划线培养,待出现单个菌落后,按照菌落的形状、直径、颜
色、透明度、边缘、粘度不同,发现有 5株不同的细菌菌株生长,挑取菌株,编号记为 X、
Y、Z、W、M,继续于牛肉膏蛋白胨含药培养基平板上培养上述 5株细菌,发现菌株 X、Y、Z
于含药培养基能够大量生长,因此决定对这 3株细菌进行研究。
降解细菌的形态特征
将所筛选到 3株细菌接种到培养皿中,置于 30℃恒温培养箱中培养 24h后,观察细菌形状、
大小、运动性和菌落特征,结果如表 1 所。
表 1降解细菌的形态特性和菌落特性
Table1Formandlawncharactersofdegradingbacteria
菌株 Strains项目
Item X Y Z
形状 Shape 杆状 球状 杆状
长或直径(µm)Diameter
宽(µm)Width 无
运动性 Motility 运动 运动 不运动
菌落特征
Charactersofbacteriacol
ony
表面光滑,边缘光滑,隆起生
长,不透明,于培养基上呈红
色。
表面光滑,边缘有褶皱,隆起生长,
不透明,于培养基上呈乳黄色。
表面光滑,边缘有褶皱,隆起生长,
透明,于培养基上呈白色。
降解细菌生理生化特征
Commented [微软用户 12]: 量和单位:请使用法定计
量单位,量名称及符号、单位、数字的用法等应符合国家
标准,书写要规范化,并注明外文字母的大小写、正斜体
及上下角标
Commented [微软用户 13]: 三位数以上加空格。
Commented [微软用户 14]: 在这一部分里,作者应该
真实、准确、客观地描述实验观察到的结果,并提供所测
定的具体数据。对于实验所观察到的结果,一定要实事求
是地叙述,无论正面或反面、阴性或阳性的结果,均应客
观报道,而不能根据自己的主观意愿随意取舍。但也要避
免将所有数据和盘托出、简单罗列的做法,对于实验数据
的叙述要分清主次,并应对实验数据进行统计学处理与分
析,以找出规律性的信息。
Commented [微软用户 15]: 表用三线表,每文尽量不
超过 6 个。表格内容可合并的尽量合并。表格应设计正确、
简洁、合理,表项应尽量简化。表中数字须上下对齐,相
邻栏内数字相同时不能用“``”或“同上”、“同左、右”等,
应一一标注。如实测为零,就标注“0”,未测或无此项(该
栏为空白)或未发现,就标注“一”实测为痕量或可略而不
计,应注明。
表内不设“备注”栏,需要说明的事项,可用简炼文字附注
于表格底线下方,且附英文。表中注释,可用“*”号。
按照试验方法进行部分细菌生理生化试验,包括芽孢染色、革兰氏染色、需氧性测定、最适 NaCl
浓度试验、接触酶试验、淀粉水解试验、甲基红试验(MR)、乙酰甲基醇试验(VP)、明胶液
化试验、柠檬酸盐利用试验、油脂水解试验、葡萄糖分解代谢形式等试验,测定结果见表 2。
部分细菌生理生化试验照片见图 1~4。图2~4略
表 2降解细菌的部分生理生化特性
Table2Physiologicalandbiochemicalcharactersofdegradingbacteria
菌株 Strains试验
Test X Y Z
革兰氏染色 Gramstain + - -
芽孢 Sporestain() 无 无 无
需氧性 Charactersofneedingoxygen + + +
接触酶 Contactenzyme + - +
淀粉水解 Starchhydrolysis() + - +
甲基红(MR)Methylred + + -
乙酰甲基醇(VP)Acetylmethylcarbinol() + - -
明胶液化 Liquefyglutin + - +
柠檬酸盐利用 Useofcitrate + + +
葡 萄 糖 分 解 代 谢 形 式
Modalityofdecomposingandmetabolizingofglucose
发酵 氧化 氧化
荧光色素 Fluorochrome - + -
硝酸盐仍原 Nitratereductase + + +
反硝化 Denitrification() + + +
乙醇氧化 Alcoholoxidation - + -
注:“+”表示生化反应(或革兰氏染色)为阳性;“-”表示生化反应(或革兰氏染色)为阴性。
Note:“ +” meanspositivebiochemicalreaction(orgramstain);“ -”
meansnegativebiochemicalreaction(orgramstain).
X Y Z
图 1菌株 X、Y 和 Z 的芽胞染色
,YandZbacteria
图2菌株 X、Y和 Z的淀粉水解试验
根据降解细菌培养特征及生理生化特征的测定结果,对 3株降解细菌进行初步鉴定,结果为:
X为丙酸杆菌属(Propionibacterium);Y 菌为海球菌属(Marinococcus);Z 菌为酸单胞杆
菌属(Acidomonas)。
降解细菌生长特性的研究
咪唑乙烟酸浓度对降解细菌生长的影响
牛肉膏蛋白胨培养液中,咪唑乙烟酸浓度为 5、10、20、50和 .·L-1时,24h 后,测
Commented [微软用户 16]: 图:图以 6 幅为限。坐标
图用方框图,图标线纵坐标在左,竖线框内,横坐标在下
栏线框内。图的主线与辅助线粗细比例为 2:1,纵横坐标
的标值、标值线必须写清,标目应使用标准的物理量和单
位符号(一般不用中文表示)。照片要黑白清晰,层次分
明,反差适中,文稿中要留插图的位置(注:尽量不用彩
色照片,彩版需支付印刷费用)。
定各菌悬液的 OD650值,各菌株的生长趋势见图 5。
图 5咪唑乙烟酸浓度对各菌株生长的影响
由图 5能够见出,培养液中的咪唑乙烟酸浓度对 3株细菌 X,Y和 Z的生长均有壹定的影响,
低浓度于 5~.·L-1范围内,各株细菌的生长量 OD650值显著增加,当浓度超过
.·L-1,菌株 Y 的生长随着药剂浓度的增大而受到抑制,其 OD650值逐渐减少,超过
.·L-1,X、Y和 Z 的生长趋势均显著下降。生长量最多的所于浓度可认定为是细菌生
长的最适浓度,说明Y的生长适宜浓度为.·L-1,X和Z的生长适宜浓度为.·L-1。
各菌株耐药能力由强到弱的顺序为 Z>X>Y。
温度对降解细菌生长的影响
当牛肉膏蛋白胨培养液,接种各菌株后,于培养温度为 15、25、30、35、40℃条件下,24h
后,测定各菌悬液的 OD650 值,各菌株的生长趋势如图 6所示。
结果表明,培养温度对各株细菌的生长也有壹定的影响。于 15~30℃范围内,温度升高,各
菌株的生长量也随之提高,当上升到壹定温度时,生长量变化趋势出现差异,菌株 X 和 Y于
30℃时生长量 OD650值达到最大,而 Z于 35℃时达最大,且于 40℃时,生长量虽有所下降,
但其生长量仍然很高,说明菌株 Z 对温度的适应范围相对较宽。
3讨论
讨论壹定要扣准文题和结果。具体地说可参考下面 5 个方面进行:
① 对结果揭示的情况作进壹步的说明和解释,特别是本研究结果所具有的理论
和实际意义;
② 结合结果深入探讨和本研究关联的新方法、新理论以及预测发展趋势;
③比较本研究和他人研究的异同,且实事求是地指出各自的优点和不足;
④总结本研究的成败关键、经验和教训,客观地反映本研究的不足,包括研究中矛
盾现象及尚难解决的问题;
⑤对进壹步的研究提出建议或指出方向。
能够加二级标题。如 、、等。
4结论
结论是全篇的总结。要对科技论文作全面的概括,应该注意的是:结论且不
仅是本文中的研究结果,而是于研究结果的基础上,进壹步得出科学的结论,也即
使研究由感性认识上升到理性认识。这是论文写作的重要壹环,它是以正文的论
述为基础,但较正文的表述更精炼、更集中、更典型、更有价值。
也能够以列出序号方式阐述。如 .等。
或者将讨论和结论整合论述。
[参考文献]
参考文献类型和标志代码
普通图书[M]、论文集、会议录[C]、汇编[G]、报纸[N]、期刊[J]、学位论文[D]、方案[R]、
标准[S]、专利[P]、数据库[DB]、电子公告[EB]、联机网络[OL]。
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Commented [微软用户 17]: 文献数量,试验报告不能
少于 10 篇,研究进展不能少于 30 篇,请注意引用《东
北农业大学学报》发表文章。
Commented [u18]: 页:7
(1)3 人以下全部著录,3 人以上可只著录前 3 人,后
加“等”字样,外文用“et al”。
(2)责任者之间用“,”分隔。
(3)责任者姓名一律采用姓前名后的著录格式。欧美著
者的名缩写,并省略缩写点,姓首字母大写。
Commented [微软用户 19]: 图书
Commented [微软用户 20]: 会议
Commented [微软用户 21]: 论文
Commented [微软用户 22]: 专利
Commented [微软用户 23]: 标准