消毒剂使用及效力验证
能消除以细胞繁殖形态出现的微生
物污染的化学物质。
消毒剂的习惯定义：
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消毒剂的分类定义（USP29 <1072>）
抗菌剂（Antiseptic)
化学杀菌剂(Chemical Disinfectant)
清洁剂(Cleaning Agent)
消毒剂(Disinfectant)
卫生洗涤剂(Sanitizing Agent)
杀孢子剂(Sporicidal Agent)
灭菌剂(Sterilant Agent)
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化学主份 类别 举例
醛类 杀孢子剂 2％戊二醛
醇类 一般消毒剂，抗菌/病
毒
70%异丙醇、75％酒精
含氯和次氯酸钠 杀孢子剂 %次氯酸钠
酚类 一般消毒剂 500µg/g氯甲酚、氯二甲酚
臭氧 杀孢子剂 8％气体重量
过氧化氢 气态灭菌剂，液体杀
孢子剂，抗菌剂
4µg/g，10％～25％溶液，3
％溶液
替代缩二胍 抗菌剂 %氯己定（洗必泰）
过氧乙酸 液态/气态灭菌剂 %，1µg/g
环氧乙烷 气态灭菌剂 600µg/g
季铵盐类 一般消毒剂，抗菌剂 200µg/g苯扎氯铵（洁尔灭）
β-丙内酯 杀孢子剂 100µg/g
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消毒剂配制
按供应商的使用说明进行配制和储存
纯化水、注射用水
洁净室及相关受控环境使用，应进行除菌过滤。
温度提高，杀菌效力增大。效力验证时，在常温下配制。
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影响消毒剂效力的因素：
pH
温度，浓度
材质和附着物质
溶剂（水）
接触时间
微生物的类型和数量
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消毒剂作用机理
钝化胞内酶活性，影响细胞的正常代谢
酚类
阻断物质运输通道
季铵盐类（＋电荷），附着于细胞膜特定部分（－电荷）
破坏微生物细胞（膜）的结构和功能
醛类、含氯、过氧化物
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微生物对消毒剂的耐受性
形成生物膜
粘性多糖物质
消毒剂的相互作用
中和反应
固有耐受性和概率残存
致死剂量
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微生物抗力
由小到大排列一般为：
细菌繁殖体
真菌繁殖体
真菌孢子
病毒
分枝杆菌
细菌芽孢
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消毒剂的选择
需控制的微生物的类型和数量
市售消毒剂的抗菌谱
消毒剂的品牌
浓度、使用方法和接触时间
待消毒物体的材质和对消毒剂的兼容性
可能影响杀菌效力的表面有机物数量
反复使用，对设备表面的腐蚀程度
对操作者的安全性
和清洁剂/其它消毒剂的相容性
交替使用方案和对产品的影响
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消毒剂验证的目的：
通过特定的微生物与某消毒剂在规定的使用
浓度下，接触规定的时间后，对微生物进行
培养、计数，考察消毒剂的消毒/杀菌效果。
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消毒剂验证的内容：
使用中稀释检测（use-dilution tests)
对不同浓度下，对消毒剂的效力进行筛选
针对不同标准菌株和环境微生物，确认接触时间
表面挑战试验（surface challenge tests)
使用标准菌株和典型环境分离微生物
选择合适的浓度和接触时间，进行试验
获得挑战微生物数量下降的对数值
对使用新消毒剂前后环境微生物的检出频率和数量进行统计
学评估（无菌生产区域、GMP要求）
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消毒剂验证步骤：
第一步：在实验室对代表细菌在规定的使用浓
度和规定的作用时间进行确认。
第二步：应用不同材质的载体，进行模拟试验
第三步：完成验证报告，形成SOP。
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验证用菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿色假单胞菌、沙
门氏菌、大肠埃希菌、枯草杆菌、白色念珠菌、黑
曲霉、环境分离菌。
菌种选择的原则:代表性,普遍性,标准菌种。(环境中
常见的污染菌)。
菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。
验证菌种：
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挑战微生物(USP 29)
AOAC挑战菌 典型环境分离菌
杀菌剂：大肠埃希菌ATCC 11229
金黄色葡萄球菌ATCC 6538
铜绿假单胞菌ATCC 15442
杀菌剂：藤黄微球菌，表皮葡萄球
菌，杰氏棒杆菌 ，泡囊假单胞菌
杀真菌剂：白色念珠菌ATCC 10231
或2091
产黄青霉ATCC 11709
黑曲霉菌 ATCC 16404
杀真菌剂：产黄青霉，黑曲霉菌
杀孢子剂：枯草芽孢杆菌ATCC
19659
杀孢子剂：球形芽孢杆菌 ，苏云金
芽孢杆菌
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准备性试验（一）
选择适合的中和剂
Letheen肉汤、D/E中和肉汤（酚类，季铵盐类）、TAT肉汤基础＋吐
温20＋卵磷脂＋胰蛋白胨
消毒剂 中和剂
醇类 稀释或吐温80
戊二醛 甘氨酸和亚硫酸氢钠
次氯酸钠 硫代硫酸钠
氯己定 吐温80和卵磷脂
氯化汞及其它汞制剂 硫乙醇酸
季铵盐类 吐温80和卵磷脂
酚类 稀释或吐温80和卵磷脂
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D/E中和肉汤（每升）
配方
胰蛋白胨 5 g
酵母膏 g
葡萄糖 10 g
硫乙醇酸钠 1 g
硫代硫酸钠 6 g
亚硫酸氢钠 g
吐温 80 5 g
卵磷脂 7 g
溴甲酚紫 g
最终 pH 于 25℃
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准备性试验（二）
中和剂毒性
将10～100 CFU的微生物加入到中和剂中
薄膜过滤，冲洗，培养，计数
与菌液对照组比较，回收率应>70％
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准备性试验（三）
中和效力
将消毒剂和中和剂混合（记录时间）
加入10～100 CFU微生物
薄膜过滤，冲洗，培养，计数
与菌液对照组比较，回收率应>70％
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验证方法 - 薄膜过滤法
菌悬液和消毒剂直接混合，
在不同的时间间隔条件下过
滤，培养后评价。
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验证准备：
- 测试菌液准备
增菌过夜，并调整至106～108 CFU/ml
- 消毒剂稀释至规定浓度。
分装10ml于若干无菌试管中；试管上标注消毒时间：如
“1分钟组” ，“5分钟组” ，“10分钟组”或其他要求的时
间段。
- 配制中和剂（分装100ml，300ml）
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验证步骤（1）：
- 接种
接种各验证菌种至盛有待验证消毒剂的试管（使接后浓度>104
CFU/ml)，混合均匀，并立即开始计时。
- 中和、过滤
将消毒剂倾入100ml中和剂中，混合，稀释（如需要），过滤，然后
用100ml中和剂清洗滤膜，滤过3次。
- 阳性对照
用无菌水代替消毒剂，步骤同上。
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验证步骤（2）：
培养和计数
取下滤膜放入规定的培养
基平板，在规定的温度、时
间培养后，记数。
和阳性对照相比，微生物数
量下降应至少3个对数值
（细菌芽孢至少2个对数值）。
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验证步骤（3）：表面挑战试验
根据设施的实际情况，选择不同材质的载体。
玻璃，不锈钢，塑料薄膜，乳胶，墙面涂料，
地面材质
接种，并确认实际数量
接触杀菌、中和、过滤……
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正确使用消毒剂（1）
1. 稀释消毒剂时应用纯化水、注射用水
2. 设备使用后作彻底清洁
3. 将环境常见菌列入验证范畴
4. 轮换使用不同的消毒剂，消毒剂间要用无菌水充分清洗
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正确使用消毒剂（2）
1. 使用消毒剂的人员要接受相关的培训
2. 严格遵守“人流”、“物流”的途径
3. 消毒的SOP：配制、使用、纠正、防护等
4. 供应商的审核和确认
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消毒剂的文件
- 标准操作规程 SOP
- 消毒剂配制记录
- 消毒剂使用记录
- 消毒剂标签
……
消毒剂文件，应该等同与原始记录。
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800-820-0865
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