DNA 重组技术的必要条件
幻灯片 24：DNA 重组技术的基本概念
定义：又称基因工程或遗传工程，是指按照人们的意愿，将一种
生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细
胞里，定向地改造生物的遗传性状的技术。
核心：实现不同生物 DNA 分子的体外拼接和在受体细胞中的
表达。
幻灯片 25：必要条件一：工具酶
限制性核酸内切酶（限制酶）
作用：能够识别双链 DNA 分子中特定的核苷酸序列，并在特
定的位点切割 DNA 分子，产生黏性末端或平末端，为 DNA 片段
的拼接提供可能。
特点：具有特异性，即一种限制酶通常只识别一种特定的核苷酸
序列，并且切割位点在该序列内部或附近。
DNA 连接酶
作用：将两个具有相同黏性末端或平末端的 DNA 片段连接起
来，形成重组 DNA 分子。
常见类型：E・coli DNA 连接酶（主要连接黏性末端）和 T4 DNA
连接酶（既能连接黏性末端，也能连接平末端）。
其他工具酶
DNA 聚合酶：用于 DNA 片段的扩增或填补缺口，如 Taq DNA
聚合酶在 PCR 技术中常用。
逆转录酶：以 RNA 为模板合成 cDNA，用于从 RNA 中获取
目的基因。
幻灯片 26：必要条件二：目的基因
定义：人们所需要的特定基因，即编码某种蛋白质或具有特定功
能的 DNA 片段。
获取途径
从基因文库中获取：包括基因组文库和 cDNA 文库，通过筛选
文库得到目的基因。
利用 PCR 技术扩增：以已知目的基因的核苷酸序列为模板，设
计引物，在体外快速扩增目的基因。
人工合成：对于核苷酸序列已知且长度较短的目的基因，可通过
化学方法人工合成。
幻灯片 27：必要条件三：载体
作用：将目的基因导入受体细胞，并在受体细胞中复制、保存和
表达。
必备条件
具有一个或多个限制酶切割位点，以便目的基因插入。
能够在受体细胞中自主复制，保证目的基因的稳定存在和扩增。
具有标记基因（如抗生素抗性基因），便于筛选含有重组载体的
受体细胞。
对受体细胞无害，不会影响受体细胞的正常生命活动。
常见类型
质粒：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核 DNA 之外，
并具有自我复制能力的小型双链环状 DNA 分子，是基因工程中最
常用的载体。
噬菌体或病毒：如 λ 噬菌体、动植物病毒等，可利用其侵染宿
主细胞的特性，将目的基因导入受体细胞。
幻灯片 28：必要条件四：受体细胞
定义：能够接受重组 DNA 分子，并使其在细胞内复制和表达
的细胞。
选择标准
具有繁殖能力，能够使重组 DNA 分子随着细胞的分裂而扩增。
对导入的重组 DNA 分子无明显的排斥反应，保证其能稳定存
在。
便于进行培养和筛选操作。
常见类型：原核细胞（如大肠杆菌）、真核细胞（如酵母菌、动
植物细胞）等，根据实验目的和基因表达的需求选择合适的受体细胞。
幻灯片 29：总结：各条件的协同作用
DNA 重组技术的实现是多个必要条件协同作用的结果：限制酶
切割目的基因和载体，DNA 连接酶将两者连接形成重组 DNA，载
体携带重组 DNA 进入受体细胞，受体细胞为重组 DNA 的复制和
表达提供环境。
这些条件相互配合，共同完成目的基因的体外重组与体内表达，
是基因工程能够定向改造生物性状的关键保障。
